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浙江大學(xué)揭示睡眠和覺醒水平的作用機制

2018-11-19 15:31:54 來源: 中國教育報

晝夜節(jié)律和睡眠穩(wěn)態(tài)是共同進化而來的生物現(xiàn)象,前者控制人類何時入睡,后者控制每天要睡多久。在果蠅、小鼠和人類中,都能觀察到這兩種行為共同作用來控制動物的周期性睡眠。隨著近年來對各種模式生物的研究,科研人員對分別調(diào)控這兩種行為的分子和神經(jīng)通路了解得很多。但在大多數(shù)生物中,對節(jié)律神經(jīng)回路如何輸出到睡眠中心的連接機制依然未知。使得這成為睡眠領(lǐng)域的一個非常重要的問題。

近日浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院百人計劃郭方研究員,以果蠅為模式生物,鑒定出其腦中的背側(cè)晝夜節(jié)律神經(jīng)元APDN1往睡眠穩(wěn)態(tài)中心-橢球體EB-R2投射的神經(jīng)回路,并將相關(guān)成果發(fā)表在知名期刊《神經(jīng)元》(Neuron)上。研究揭示了該神經(jīng)回路決定睡眠和覺醒水平的作用機制,為闡述晝夜節(jié)律回路和睡眠回路的連接機制提供了非常重要的實驗依據(jù)。

這項科研工作的第一作者為浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物系郭方研究員,郭方研究員和2017年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎獲得者、美國布蘭迪斯大學(xué)邁克爾·羅斯巴殊(Michael Rosbash)教授為本論文的共同通訊作者。

尋找兩者的關(guān)系,前提是有兩個實驗基礎(chǔ),一個是郭方和導(dǎo)師羅斯巴殊之前就有過明確的研究,果蠅的晝夜節(jié)律神經(jīng)元APDN1是控制睡眠穩(wěn)態(tài)的閥門,同時在2016年,約翰·霍普金斯大學(xué)的科學(xué)家們已經(jīng)鑒定出果蠅中調(diào)控睡眠穩(wěn)態(tài)的神經(jīng)元是橢球體EB-R2。

因此研究的主線就落到APDN1與橢球體EB-R2的關(guān)系上。

實驗中,郭方及其同事們發(fā)現(xiàn)果蠅的APDN1神經(jīng)元有兩簇投射,一簇向果蠅大腦前側(cè),一簇向果蠅大腦后側(cè)。前期的研究中,科學(xué)家們關(guān)注的是向后的這一簇,它起著抑制果蠅的活動的作用,該研究發(fā)現(xiàn)了果蠅節(jié)律神經(jīng)元控制睡眠的奧秘。

那么APDN1的前一簇往哪個腦區(qū)投射,生物學(xué)的功能是什么?

他們利用最新發(fā)明的神經(jīng)回路技術(shù)——跨突觸顯示技術(shù),追蹤投射神經(jīng)元的走向。并通過膨脹顯微鏡(Expansion Microscopy)放大并透明化果蠅的大腦,發(fā)現(xiàn)這簇軸突往前投射到一個叫AOTU的腦區(qū)。鈣成像技術(shù)表明,它們支配著一群特殊的TuBu神經(jīng)元,并通過其與更高腦區(qū)域的睡眠穩(wěn)態(tài)中心-橢球體EB-R2偶聯(lián)。

最終郭方團隊在形態(tài)學(xué)上鑒定出果蠅的背側(cè)節(jié)律神經(jīng)元APDN1往果蠅的睡眠穩(wěn)態(tài)中心與橢球體EB-R2投射的神經(jīng)回路。神經(jīng)元APDN1作為一個“開關(guān)”調(diào)控著EB-R2,激活A(yù)PDN會在EB-R2中誘導(dǎo)出類似人類睡眠時的特定振蕩模式。

已有的研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)人類進入睡眠時會形成特定頻率振蕩的腦電波。那么,郭方通過鈣成像檢測到的果蠅調(diào)控睡眠腦區(qū)的高頻振蕩,會不會和高等動物的一樣,起著睡眠時降低對外界反應(yīng)的作用?

在實驗中,郭方通過機械刺激偶聯(lián)光遺傳學(xué)實驗來證明自己的假設(shè)。當(dāng)果蠅睡眠時,他每隔半個小時都給果蠅一個機械振動,果蠅都會產(chǎn)生受激反應(yīng),從睡眠中驚醒,呈現(xiàn)出規(guī)律性的高活動,然后再逐漸入睡。

第一個實驗,當(dāng)只激活A(yù)PDN1神經(jīng)元時,大腦中振蕩波產(chǎn)生。果蠅在受到刺激后懶得動,醒來一下又迅速入睡。

第二個實驗,科研人員還通過光遺傳學(xué)的方式,激活DN1神經(jīng)元,果蠅進入睡眠,再通過特定波長的綠光抑制EB-R2神經(jīng)元中的振蕩波。通過觀察果蠅的行為發(fā)現(xiàn),受到刺激時果蠅會迅速反應(yīng),顯著性地增加了高活動狀態(tài),才重新進入睡眠。

通過這些實驗,郭方發(fā)現(xiàn),果蠅EB-R2中產(chǎn)生的特定振蕩模式是一道“防火墻”,可以“屏蔽”外界信息的輸入,讓果蠅對外界刺激不敏感。“特定腦區(qū)的神經(jīng)元產(chǎn)生某些頻率的共振,可能讓神經(jīng)元鎖定在某種狀態(tài),使外界信息無法輸入。”郭方說,“當(dāng)通過人為打破‘防火墻’,果蠅無法進入深睡狀態(tài)。”

同時,郭方也告訴記者,目前尚待解決的科學(xué)問題是“防火墻”是如何導(dǎo)致外界信息無法傳入,這一神經(jīng)回路傳遞信號的遞質(zhì)是什么,具體內(nèi)部機制有待進一步回答。

對這道睡眠“防火墻”的研究,還是一項起點性的工作。未來,可以通過藥物治愈失眠,讓輕度睡眠患者擁有更好的睡眠質(zhì)量??蒲腥藛T也猜想,隨著對深度睡眠機制研究的深入,或許以后充足的睡眠不需要8個小時以上,通過調(diào)控深度睡眠,在更快時間內(nèi)補充精力,睡眠2小時精神一整天也不無可能。“那時候,供人類自由支配的時間更長,不用在有限的覺醒,開啟‘倍速’人生。”

《神經(jīng)元》匿名評審專家們對這一研究結(jié)果也評價道:“該論文提供了(果蠅)生物鐘和睡眠調(diào)節(jié)之間目前最全面的聯(lián)系,并為理解高度保守的睡眠和晝夜節(jié)律整合的神經(jīng)機制提供了平臺。研究中應(yīng)用了最先進的遺傳工具和實驗技術(shù)來繪制神經(jīng)回路。”“這一研究將對該領(lǐng)域產(chǎn)生巨大影響。”

一位匿名專家指出,郭方團隊的研究使用多種先進的技術(shù)組合提供了令人信服的證據(jù),證明了將晝夜節(jié)律神經(jīng)元連接到睡眠中心的神經(jīng)回路及其功能。那么他們是如何把這些技術(shù)更好地使用到實驗中呢?這就要提到郭方和他的同事們研發(fā)的“果蠅”盒子專利。

這個實驗盒,具有體積輕便,易于操作等優(yōu)點,利用攝像頭持續(xù)記錄96只果蠅的行為,能高通量的篩選調(diào)控果蠅行為的基因和神經(jīng)回路。

那么這個果蠅盒子是如何想到的呢?

這里先講一個“失眠的果蠅”故事。和羅斯巴殊教授同時獲得去年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎的杰夫·霍爾(Jeff Hall)教授,上世紀70年代曾和同事在其導(dǎo)師西莫爾·本則爾(Seymour Benzer)教授的實驗室里,發(fā)現(xiàn)了一些“睡不好”的果蠅:其晝夜節(jié)律基因受到突變,很有個性的睡得早,醒得早。于是本則爾對這些果蠅產(chǎn)生了興趣,發(fā)明了儀器來監(jiān)測其晝夜節(jié)律。

這個神奇的“果蠅”盒子,也是郭方在羅斯巴殊教授實驗室里,某一天晚上熬夜做實驗,靈機一動想到的。“最早的原型是2015年開始研制,現(xiàn)在已經(jīng)量產(chǎn)。不僅可以作為果蠅的實驗平臺,還可以用于記錄蚊子、斑馬魚等小型動物的行為。”郭方說。

郭方說,隨著相關(guān)實驗的引入,他們在這個果蠅盒子里,裝上了625nm的紅色LED和550nm的綠色LED,能快速對神經(jīng)元活性進行雙向調(diào)控。同時也裝上了電磁閥控制的睡眠剝奪裝置,能定量地對果蠅進行機械刺激,來檢測果蠅的覺醒閾值和睡眠深度。

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